1、病理樣本保存方法
固定法：
（1）浸入法
從人體或動物取下的小塊組織，立即置入液態(tài)固定劑中進行固定，這是最常用的方法。通常標(biāo)本與固定液的比例為1:10~1:20，但組織塊不宜過大過厚，否則固定液不能迅速滲透，條件允許可2h以內(nèi)需更換一次固定液。
（2）灌注法
組織塊體積大或固定液極難滲入內(nèi)部，可將固定液經(jīng)心臟灌入，經(jīng)血管分支到達(dá)整個組織和全身，從而充分固定。該法普遍應(yīng)用于腦部疾病的科學(xué)研究。利用天然血管網(wǎng)，快速、均勻地保存標(biāo)本，以保持標(biāo)本類似活體狀態(tài)、盡量保持抗原性。
凍存法：
冰凍樣本能夠較好的保存組織的抗原免疫活性，其制作過程較石蠟切片快捷、簡便，缺點是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，組織形態(tài)不完整，不利于診斷；
① 動物組織需盡快取材保存，取材應(yīng)在冰上進行，取材后組織用生理鹽水沖洗干凈，去除血漬和污物，并剔除非研究所需的組織;
② 吸干水漬并切小塊，放入已標(biāo)記的保存容器中，液氮速凍后，轉(zhuǎn)運至-80℃冰箱保存，運輸時請使用大體積干冰運輸。
常規(guī)組織解剖取材固定注意事項：
① 取材手法：要求解剖器械鋒利，盡可能選擇薄且鋒利的手術(shù)刀片，減少剪刀的使用，避免擠壓挫傷標(biāo)本表面。較準(zhǔn)確地取到目的部位組織，夾取標(biāo)本的時候盡量遠(yuǎn)離目的區(qū)域組織。
② 取材速度：盡量保證樣本離體后1min內(nèi)放入到合適的固定液內(nèi)。如果一只動物同時取多種器官，優(yōu)先取消化器官，其次取中樞神經(jīng)系統(tǒng)器官(腦，脊髓等)，皮膚、肌肉等可放到最后取。
③ 組織塊大?。?/span>未經(jīng)灌注的標(biāo)本組織厚度不要超過1cm，因為固定液的滲透作用有限。
④ 固定液：針對不同的標(biāo)本特點及實驗?zāi)康囊欢ㄒx用正確的固定液。
⑤ 固定液量：固定液體積為組織的10-20倍，組織能在容器內(nèi)自由移動，不貼壁不沉底，做好清晰標(biāo)記。
⑥ 固定溫度：常溫即可，無需冷藏，切勿冷凍結(jié)冰，否則固定液結(jié)冰形成冰晶嚴(yán)重破壞組織形態(tài)結(jié)構(gòu)。
⑦ 在PBS或者生理鹽水中緩慢沖洗，去除血液，用濾紙吸干水分，保持固定液不渾濁。
⑧ 單獨的小組織（如類器官軟骨球）需直徑達(dá)到1.5mm才能進行檢測，包裹在水凝膠里面的類器官需做標(biāo)記（可用標(biāo)記品紅），以便后期切片能夠定位組織位置。
常用實驗動物（大小鼠、實驗兔等）的各臟器取材方法（參考）
注：當(dāng)組織塊不超過2.0cm×2.0cm×0.5cm時，推薦整體取材固定；如大動物相關(guān)臟器或組織過大，可參考以下方法
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系統(tǒng)名稱 |
組織部位 |
取材方法（參考) |
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消化系統(tǒng) |
胃 |
無特別指定時，選取縱向垂直于胃壁取一長條切片（同時切到胃粘膜和肌層），注意清理干凈胃組織內(nèi)容物 |
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腸 |
可選橫切圓環(huán)狀、或縱切長條狀，肌層容易脫落,取材時應(yīng)動作輕緩，用PBS或生理鹽水緩慢沖洗腸道內(nèi)部，祛除腸道內(nèi)容物，保持固定液不渾濁，不宜太短（2cm左右），太短容易造成后期切片腸道肌層不完整 |
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肝 |
每頁肝臟剖開固定（使用手術(shù)刀）,可取葉肝切最大面，葉肝橫切看月牙狀，及其他肉眼可見的病變或者突起。若肉眼不可見，建議間隔多做切片，以便后期診斷 |
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胰腺 |
整體取材，大小不超過2.0cm×2.0cm×0.5cm |
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呼吸系統(tǒng) |
肺臟 |
大鼠可取一葉橫切肺，小鼠可取單獨一葉肺（左肺）或五葉整肺（盡可能全肺包埋 )，若有病變可取病健交界的位置 |
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氣管 |
氣管任意一段1.0-2.0cm，大動物不超過2.0cm×2.0cm×全層 |
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泌尿系統(tǒng) |
腎臟 |
剖開固定（使用手術(shù)刀）,縱切選冠狀蠶豆?fàn)钭畲竺?，橫切取扇形最大面 |
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膀胱 |
小動物整體取材，或取包括全層結(jié)構(gòu)的膀胱組織一塊，大小不超過2.0cm×2.0cm |
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內(nèi)分泌系統(tǒng) |
甲狀腺 |
整體取材，大小不超過2.0cm×2.0cm×0.5cm |
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腎上腺 |
整體取材，大小不超過2.0cm×2.0cm×0.5cm |
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循環(huán)系統(tǒng) |
心臟 |
灌注固定（如果只做病理），或者剖開固定（使用手術(shù)刀） |
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主動脈 |
主動脈一段1~1.5cm |
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神經(jīng)系統(tǒng) |
大腦 |
建議灌注后整體取材，這樣固定效果更好，未做灌注取材的樣本在后期組織很容易散開 |
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小腦 |
建議灌注后整體取材，這樣固定效果更好，未做灌注取材的樣本在后期組織很容易散開 |
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脊髓 |
頸、胸和腰髓三段0.5－1.0cm，需使用特定固定液進行固定 |
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垂體 |
整體取材 |
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免疫系統(tǒng) |
脾臟 |
取1－2塊組織，包括包膜，如果眼觀有病變，取病健交界的位置 |
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淋巴結(jié) |
一般整體取腸系膜淋巴結(jié)和給藥局部淋巴結(jié)，最大不超過2.0cm×2.0cm×0.5cm |
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胸腺 |
可整體取材，取胸腺組織一塊并帶包膜，或包埋其中一頁橫切（最大面） |
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生殖系統(tǒng) |
卵巢 |
整體取材，盡量剔除周圍脂肪組織，以免固定漂浮 |
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子宮 |
整體取材或選擇橫切（環(huán)切），最大不超過2.0cm×2.0cm×全層 |
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睪丸 |
兩側(cè)睪丸整體取材或選擇橫（縱）切，需使用特定固定液進行固定 |
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附睪 |
橫切附睪頭或其他規(guī)定方向 |
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前列腺 |
整體取材，最大不超過2.0cm×2.0cm×0.5cm |
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其他組織 |
皮膚 |
縱切（觀察皮膚全層）或橫切（毛囊橫切），要提前備皮，皮膚固定不要卷曲，需要平整鋪開 |
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腫瘤 |
整體取材，若組織過大過厚需要切開固定（手術(shù)刀），切最大橫截面 |
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肌肉 |
優(yōu)先選取肌束生長方向明顯的位置選擇橫切或豎切，需特定固定液固定 |
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眼球 |
整體取材，勿用鑷子用力夾取眼球組織， 需使用特定固定液進行固定 |
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骨組織 |
需充分脫鈣，組織變軟后方可取材,若只觀察骨或關(guān)節(jié)，剔除周圍肌肉組織 |
常規(guī)病理形態(tài)樣本保存及運輸方法（以下組織大部分用于做石蠟切片或冰凍切片）
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組織類型 |
保存條件 |
保存運輸條件 |
組織類型 |
保存條件 |
保存運輸條件 |
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常規(guī)動物組織 |
10%中性甲醛或4%多聚甲醛固定液固定 |
常溫 |
細(xì)胞爬片 |
爬片后4%多聚固定0.5h，吸取固定液后立即送檢 |
常溫 |
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眼球 |
眼球固定液固定 |
常溫 |
新鮮組織做冰凍切片 |
液氮速凍后﹣80℃長期保存 |
干冰或液氮 |
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肌肉 |
肌肉固定液固定 |
常溫 |
固定組織做冰凍切片 |
對應(yīng)的固定液，常溫 |
常溫 |
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睪丸 |
睪丸固定液固定 |
常溫 |
脫鈣完成的骨組織或鈣化組織 |
75%保存即送 |
常溫 |
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脊髓 |
脊髓固定液固定 |
常溫 |
冰凍切片 |
-20℃保存 |
干冰+少量冰袋 |
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